淺述如何辨別熒光定量PCR試劑盒的好壞
點擊次數(shù)：683 更新時間：2020-05-21
熒光定量PCR試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測肌肉組織、牛奶等樣品中的地塞米松，試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的地塞米松藥物和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗地塞米松藥物抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含地塞米松藥物含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中地塞米松藥物的殘留量。
熒光定量PCR試劑盒可用作ELISA測定的標(biāo)本十分廣泛，體液、分泌物和排泄物等均可作標(biāo)本，以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定，有些則需經(jīng)預(yù)處理。大部分ELISA檢測均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只要待血清自然凝固收縮后即可取得。除特殊情況外，在醫(yī)學(xué)檢驗中均以血清作為檢測標(biāo)本。在ELISA中血漿和血清可同等應(yīng)用。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中，溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。
熒光定量PCR試劑盒辨別好壞的方法：
1、可采用已知濃度的重組細(xì)胞因子，稀釋到檢測范圍內(nèi)作為樣本加入，看檢測的準(zhǔn)確性。
2、選定一個檢測范圍內(nèi)的濃度做多孔重復(fù)，可看出平行性好不好。即板內(nèi)CV值的大小，此操作時需要小心加樣的準(zhǔn)確性。對一些制作較粗糙的試劑盒來說，板間CV值是較大的。
3、如果有相同指標(biāo)的熒光定量PCR試劑盒，可用對方的標(biāo)準(zhǔn)品作為樣本，分別加入各自的試劑盒做檢測，以檢測試劑盒的真實性，準(zhǔn)確性。如其中一種是的，比較可靠的話，可作為標(biāo)準(zhǔn)來驗證另一試劑盒的準(zhǔn)確程度。
4、對用待測指標(biāo)的重組細(xì)胞因子做試劑盒說明書上標(biāo)定的zui小濃度稀釋，可測出靈敏度，建議5個復(fù)孔以上才有意義。一般以20個復(fù)孔做出的結(jié)果作為檢測限。用此實驗可驗證出所購試劑盒的靈敏度是否如說明書所述，也可判斷出所購試劑盒是否有夸大之說。
